Isopeptag

Das Isopeptag ist ein Protein-Tag von sechzehn Aminosäuren, das zur Bestimmung von Protein-Protein-Interaktionen verwendet werden kann.[1]

Eigenschaften

Durch die Kopplung des Isopeptags an den Bindungspartner des rekombinanten Proteins wird die Bindung durch Vernetzung über eine Isopeptidbindung am Isopeptag (TDKDMTITFTNKKDAE) fixiert. Das Isopeptag ist vom Pilin-Protein Spy0128 aus Streptococcus pyogenes abgeleitet. Spy0128 enthält zwei intramolekulare, autokatalytisch gebildete Isopeptidbindungen,[2] die die Stabilität eines Pilus bewirken. Durch Entfernen eines β-Faltblatts des Spy0128 und somit einer der beiden Isopeptidbindungen entstand das Isopeptag. Die Isopeptidbindung erfolgt bei Temperaturen zwischen 4 °C und 37 °C, bei pH-Werten zwischen fünf und acht, Redox-unabhängig und in Anwesenheit geläufiger Tenside.[1] Das enzymatische Isopeptag kann auch in das Isopeptag und ein enzymatisch aktives Proteinfragment geteilt werden, welche – an zwei unterschiedliche Proteine gekoppelt – einen Förster-Resonanzenergietransfer zwischen zwei Fluorophoren vermitteln können.[3]

Einzelnachweise

B. Zakeri, M. Howarth: Spontaneous intermolecular amide bond formation between side chains for irreversible peptide targeting. In: Journal of the American Chemical Society. Band 132, Nummer 13, April 2010, ISSN 1520-5126, S. 4526–4527, doi:10.1021/ja910795a, PMID 20235501.
H. J. Kang, F. Coulibaly, F. Clow, T. Proft, E. N. Baker: Stabilizing isopeptide bonds revealed in gram-positive bacterial pilus structure. In: Science. Band 318, Nummer 5856, Dezember 2007, ISSN 1095-9203, S. 1625–1628, doi:10.1126/science.1145806, PMID 18063798.
H. Abe, R. Wakabayashi, H. Yonemura, S. Yamada, M. Goto, N. Kamiya: Split Spy0128 as a potent scaffold for protein cross-linking and immobilization. In: Bioconjugate Chemistry. Band 24, Nummer 2, Februar 2013, ISSN 1520-4812, S. 242–250, doi:10.1021/bc300606b, PMID 23350748.

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[zakeri-1] B. Zakeri, M. Howarth: Spontaneous intermolecular amide bond formation between side chains for irreversible peptide targeting. In: Journal of the American Chemical Society. Band 132, Nummer 13, April 2010, ISSN 1520-5126, S. 4526–4527, doi:10.1021/ja910795a, PMID 20235501.

[2] H. J. Kang, F. Coulibaly, F. Clow, T. Proft, E. N. Baker: Stabilizing isopeptide bonds revealed in gram-positive bacterial pilus structure. In: Science. Band 318, Nummer 5856, Dezember 2007, ISSN 1095-9203, S. 1625–1628, doi:10.1126/science.1145806, PMID 18063798.

[3] H. Abe, R. Wakabayashi, H. Yonemura, S. Yamada, M. Goto, N. Kamiya: Split Spy0128 as a potent scaffold for protein cross-linking and immobilization. In: Bioconjugate Chemistry. Band 24, Nummer 2, Februar 2013, ISSN 1520-4812, S. 242–250, doi:10.1021/bc300606b, PMID 23350748.